Что из себя представляют сами графики?

1⃣Положительный контроль, опираясь на который мы анализируем кривые образцов. Обычно кривые проб при положительном результате поднимаются примерно на тех же циклах, что и контроль – от 20-го до 35-го цикла.
2⃣ Высококопийный образец. Таковыми можно считать все кривые, поднявшиеся до 20-го цикла и имеющие высокий уровень флюоресценции.
3⃣ Кривые, поднявшиеся после 35-го, но до 40-го цикла. Они считаются низкокопийными, с условием, что имеют несколько заниженный уровень флюоресценции, близкий к уровню контроля. Такие пробы повторно исследуются дабы исключить лабораторную ошибку!
4⃣Отсутствие графика.

А была ли реакция вообще? Вдруг просто не среагировали компоненты? И на эти вопросы врачи лаборатории готовы ответить, потому что существует внутренний контроль!

🔘Внутренний контроль вносится в каждую пробирку без исключения. По результатам этого контроля можно оценить успех реакции. Если внутренний контроль не прошёл и результат отрицательный, то исследование считается не действительным и должно быть выполнено повторно с самого начала.

💙 Чтобы всё было точно, четко, достоверно в лаборатории на все есть контроли. Вы нам слово - мы вам «контроль прошел».

🔴Положительный контрольный образец. Должен быть положительным. С его помощью мы контролируем, что образец и реакционная смесь подготовлены верно и пригодны к обнаружению целевой нуклеиновой кислоты.
🔘Отрицательный контрольный образец. Должен быть отрицательным. Позволяет судить о контаминации, при которой такой контроль будет положительным.

Если какой-то из контролей сработал некорректно – это повод выполнить исследование повторно и плакать врачу ПЦР-отдела.

Именно таким образом врач оценивает большинство результатов ПЦР. Как видите, приведённая методика позволяет оценить наличие или отсутствие искомой нуклеиновой кислоты в образце и не предусматривает количественного результата, поэтому вы получаете результат «обнаружено» или «не обнаружено».

#DuoCor_Lab_микробиология
#DuoCor_Lab_ПЦР

Почему для ПЦР исследования используется определённый материал, а не любой, какой хочется?

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это один из самых точных методов диагностики, который позволяет выявлять генетический материал возбудителей (вирусов, бактерий, паразитов) в биологических материалах. Однако для того чтобы ПЦР показала точный результат, необходимо правильно выбрать материал для анализа. Разные патогены локализуются в определённых органах и тканях, и если материал выбран неверно, вероятность получения ложного результата значительно увеличивается.

1⃣ Тропность возбудителя и локализация инфекции
Как правило, каждый паразит, патогенная бактерия или вирус вызывают в организме ограниченное число форм заболеваний. Так происходит из-за того, что они имеют тропность к определённым тканям: там они размножаются, вызывают заболевания, и там же нам нужно их искать методом ПЦР.
Например, вирусы, которые поражают дыхательные пути, будут в высоких концентрациях в мазках из верхних дыхательных путей или бронхиальных смывах, а бактерии, вызывающие кишечные инфекции, будут выделяться с фекалиями.

🟥Для того чтобы диагностировать инфекцию с помощью ПЦР, важно выбрать тот материал, где возбудитель локализуется в наибольшем количестве. Нет смысла искать вирус там, где его нет или очень мало. Если для ПЦР используется неправильный материал, мы рискуем получить ложный или недостоверный результат, а значит, поставить неправильный диагноз.🟥

🇯🇵Ярким примером является поиск боррелий в крови. При исследовании крови на боррелии, мы их там не обнаружим (ведь их там и не может быть!), и сделаем ложный вывод, будто бы мы исключили боррелиоз из списка дифференциальных диагнозов. Однако это будет заблуждением, потому что был исследован некорректный материал.

2⃣ Концентрация возбудителя в различных материалах
Зачастую патоген действительно может быть обнаружен более, чем в одной локализации. Например, некоторые вирусы имеют короткий период виремии в начале заболевания, но сдавать кровь в таких случаях – плохая идея. Виремия может быть незначительной или и вовсе уже закончиться. В то же время концентрация вируса в той локализации, к которой он тропен и где вызывает заболевание, будет значительной.

🇯🇵Здесь примером будет ПЦР исследование крови на коронавирус при инфекционном перитоните кошек. Виремия у таких кошек возможна, но не обязательна, и высок риск отрицательного результата у животных с ИПК. В то же время у части кошек, которые не имеют диагноза ИПК и не подозрительны в его отношении, ПЦР крови на коронавирус будет положительным.
🟥Поэтому даже при условии, что вирус найти в крови возможно – это неудачный выбор. Нам необходим материал, в котором возбудитель есть у большинства больных животных, но нет у здоровых.🟥

3⃣ Когда можно сдать нетипичный материал для ПЦР?
Выше мы уже упоминали, что в силу своих особенностей микроорганизмы, как правило, вызывают ограниченное число форм заболеваний. И исходя из наиболее вероятной формы существует стандартный выбор материала, который используется в ПЦР.

❓Но иногда бывают и нетипичные случаи. Только тогда будет оправдан выбор нестандартного биоматериала, но только если это связано с особенностями течения заболевания или локализацией возбудителя на разных стадиях болезни. И совсем скоро мы покажем вам один такой пример :)

#DuoCor_Lab_микробиология
#DuoCor_Lab_ПЦР